畢赤酵母宿主蛋白酶聯(lián)檢測試劑盒是用來定量分析以畢赤酵母為表達(dá)細(xì)胞的生物藥物中宿主蛋白雜質(zhì)的試劑盒。

畢赤酵母宿主蛋白酶聯(lián)檢測試劑盒是用來定量分析以畢赤酵母為表達(dá)細(xì)胞的生物藥物中宿主蛋白雜質(zhì)的試劑盒。首先，用不同濃度的畢赤酵母標(biāo)準(zhǔn)蛋白制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來分析生物藥物宿主細(xì)胞殘留蛋白的含量。具體方法為：先將畢赤酵母標(biāo)準(zhǔn)蛋白或者待測樣品適當(dāng)稀釋后加入已包被好

抗畢赤酵母宿主蛋白抗體的96孔平板中。經(jīng)過1.5小時(shí)的保溫，宿主細(xì)胞蛋白與已經(jīng)固定在平板上的抗體結(jié)合形成抗原－抗體復(fù)合物。此復(fù)合物被隨后加入的生物素標(biāo)記的抗畢赤酵母宿主蛋白的抗體結(jié)合并進(jìn)一步形成更高級(jí)的復(fù)合物，反應(yīng)45分鐘后洗去未結(jié)合的物質(zhì)。再加入鏈霉親合素-辣根過氧化物酶復(fù)合物，靜置30分鐘。因鏈霉親合素可以與任何帶生物素標(biāo)記的抗體相結(jié)合，從而使鏈霉親合素-辣根過氧化物酶復(fù)合物連接到平板上。接下來沖洗掉未結(jié)合的物質(zhì)，加入TMB底物。固相上的酶催化底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，待顏色反應(yīng)一段時(shí)間后，終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定其結(jié)果，此結(jié)果能間接地反應(yīng)結(jié)合到平板上的的宿主細(xì)胞蛋白數(shù)量的多少。根據(jù)畢赤酵母宿主蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲定量分析生物藥物中宿主細(xì)胞殘留蛋白的含量。