基因芯片實(shí)驗(yàn)外包原理
利用雜交的原理,即DNA根據(jù)堿基配對(duì)原則,在常溫下和中性條件下形成雙鏈DNA分子,但在高溫、堿性或有機(jī)溶劑等條件下,雙螺旋之間的氫鍵斷裂,雙螺旋解開(kāi),形成單鏈分子(稱(chēng)為DNA變性,DNA變性時(shí)的溫度稱(chēng)Tm值)。變性的DNA黏度下降,沉降速度增加,浮力上升,紫外吸收增加。當(dāng)消除變性條件后,變性DNA兩條互補(bǔ)鏈可以重新結(jié)合,恢復(fù)原來(lái)的雙螺旋結(jié)構(gòu),這一過(guò)程稱(chēng)為復(fù)性。復(fù)性后的DNA,其理化性質(zhì)能得到恢復(fù)。
利用DNA這一重要理化特性,將兩個(gè)以上不同來(lái)源的多核苷酸鏈之間由于互補(bǔ)性而使它們?cè)趶?fù)性過(guò)程中形成異源雜合分子的過(guò)程稱(chēng)為雜交(hydridization)。雜交體中的分子不是來(lái)自同一個(gè)二聚體分子。由于溫度比其他變性方法更容易控制,當(dāng)雙鏈的核酸在高于其變性溫度(Tm值)時(shí),解螺旋成單鏈分子;當(dāng)溫度降到低于Tm值時(shí),單鏈分子根據(jù)堿基的配對(duì)原則再度復(fù)性成雙鏈分子。因此通常利用溫度的變化使DNA在變性和復(fù)性的過(guò)程中進(jìn)行核酸雜交。
基因芯片實(shí)驗(yàn)外包數(shù)據(jù)分析(以miRNA芯片分析為例)
標(biāo)準(zhǔn)分析
芯片預(yù)處理與標(biāo)準(zhǔn)化;
篩選差異表達(dá)microRNA;
microRNA聚類(lèi)圖、火山圖以及熱圖等;
microRNA靶基因預(yù)測(cè),基于多數(shù)據(jù)庫(kù)整合的靶基因預(yù)測(cè)以及上海豐核自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的預(yù)測(cè)軟件同時(shí)識(shí)別;
對(duì)預(yù)測(cè)的microRNA的靶基因進(jìn)行GO富集分析通路富集分析等。
個(gè)性化分析
1.microRNA網(wǎng)絡(luò)分析:microRNA靶基因失調(diào)網(wǎng)絡(luò);microNRA功能協(xié)同作用網(wǎng)絡(luò)。
2.microRNA與其他芯片整合分析:與lncRNAs芯片結(jié)果聯(lián)合分析(ceRNA Analysis);與mRNA芯片整合分析;與DNA甲基化芯片結(jié)果聯(lián)合分析。
3.與臨床數(shù)據(jù)整合分析
基因芯片實(shí)驗(yàn)外包