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濾光片在流式細胞儀中應用

流式細胞儀是測量染色細胞標記物熒光強度的細胞分析儀，是在單個細胞分析和分選基礎上發(fā)展起來的對細胞的物理或化學性質（如大小、內部結構、DNA、RNA、蛋白質、抗原等）進行快速測量并可分類收集的高技術儀器。

流動細胞儀主要有以下五部分構成：

1.                      流動室及液流系統(tǒng)

2.                      激光源及光學系統(tǒng)

3.                      光電管和檢測系統(tǒng)

4.                      計算機和分析系統(tǒng)

流動室及液流系統(tǒng)

流動室由樣品管、鞘液管和噴嘴等組成，常用光學玻璃、石英等透明、穩(wěn)定的材料制作。樣品管貯放樣品，單個細胞懸液在液流壓力作用下從樣品管射出；鞘液由鞘液管從四周流向噴孔，包圍在樣品外周后從噴嘴射出。為了保證液流是穩(wěn)液，一般限制液流速度υ<10m/s。

激光源及光學系統(tǒng)

經特異熒光染色的細胞需要合適的光源照射激發(fā)才能發(fā)出熒光供收集檢測。常用的光源有弧光燈和激光；激光器又以氬離子激光器為普遍，也有配和氪離子激光器或染料激光器。

在激光光源和流動室之間有兩個圓柱形透鏡，將激光光源發(fā)出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成和細胞的直徑相近，在這種橢圓形激光光斑內激光能量成正態(tài)分布，使通過激光檢測區(qū)的細胞受照強度一致。而光學系統(tǒng)則是由若干組透鏡、小孔、濾光片組成，主要作用是將不同波長的熒光信號送到不同的光電倍增管。

光電管和檢測系統(tǒng)

經熒光染色的細胞受合適的光激發(fā)后所產生的熒光是通過光電轉換器轉變成電信號而進行測量的。光電倍增管（PMT）最為常用。PMT的響應時間短，僅為ns數(shù)量級；光譜響應特性好，在200～900nm的光譜區(qū)，光量子產額都比較高。也有用硅光電二極管的，它在強光下穩(wěn)定性比PMT好。

計算機和分析系統(tǒng)

經放大后的電信號被送往計算機分析器。多道的道數(shù)是和電信號的脈沖高度相對應的，也是和光信號的強弱相關的。對應道數(shù)年縱坐標通常代表發(fā)出該信號的細胞相對數(shù)目。多道分析器出來的信號再經模-數(shù)轉換器輸往微機處理器編成數(shù)據(jù)文件

流式細胞儀主要用到三類濾光片：

1：長波通濾光片（LPF）--只允許特定波長以上的光線通過；

2：短波通濾光片（SPF）--只允許特定波長以下的光線通過；

3：帶通濾光片（BPF）--只允許特定波長的光線通過

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